高中生物知识点：实验：用高倍显微镜观察叶绿体和线粒体
逍遥右脑 2017-06-13 18:26
用高倍显微镜观察叶绿体和线粒体
2．材料的选取
(1)常用藓类叶片（或是菠菜叶稍带些叶肉的下表皮）。
(2)原因： ①藓类叶片仅有一层叶肉细胞。 ②菠菜叶接近下表皮的叶肉细胞是海绵组织，细胞排列疏松，细胞分散，易撕取，便于观察。
3．实验流程
(1)观察叶绿体
知识点拨：
1、制作藓叶临时装片观察叶绿体时，要保持叶片有水状态，若叶绿体失水，就会缩成一团，将无法观察。2、制作观察线粒体的临时装片时，是滴一滴健那绿染液于载玻片中央用于染色，而不是滴一滴生理盐水。3、观察线粒体一般选用动物或人体细胞，而不选取植物细胞，其原因是经健那绿染色的线粒体颜色为蓝绿色，与叶绿体颜色相近，会影响对线粒体的观察。
知识拓展：
1、叶绿体和线粒体的分布：对于植物叶片，上表皮叶绿体分布较多，便于吸收光照进行光合作用。线粒体在细胞中的分布是不均匀的，代谢旺盛的部位，线粒体较多。
2、叶绿体在细胞内可随细胞质的流动而流动，同时受光照强度的影响。叶绿体在弱光下以最大面积朝向光源；强光下则以侧面或顶面朝向光源。实验观察时可适当调整光照强度和方向以便于观察。
例下列关于“用高倍显微镜观察叶绿体和线粒体”的实验说法不正确的是( )
A．健那绿染液是一种活细胞染料，几乎不损伤细胞
B．离倍显微镜下，可看到绿色、扁平的椭球形或球形的叶绿体
C．健那绿染液可将细胞质染成蓝绿色
D．藓类叶片可直接放在载玻片上观察叶绿体
答案C
相关高中生物知识点：月季的花药培养
月季的花药培养：
1、被子植物的花粉发育
（1）被子植物的雄蕊通常包含花丝、花药两部分。花药为囊状结构，内部含有许多花粉。
（2）花粉是单倍体的生殖细胞。被子植物花粉的发育要经历小包子四分体时期、单核期和双核期等阶段。
2、产生划分植株的两种途径：一种是花粉通过胚状体阶段发育为植株，另一种是花粉在诱导培养基上先形成愈伤组织，再将其诱导分化成植株。
两种途径之间没有绝对的界限，主要取决于培养基中激素的种类及其浓度配比。
3、影响花药培养的因素：
（1）材料的选择：一般来说，在单核期（通常是完全未开放的花蕾），细胞核由中央移向细胞一侧的时期，花药成功率最高。
（2）培养基的选择。
（3）此外，亲本植株的生长条件、材料的低温预处理以及接种密度等对诱导成功率又一定影响。
4、材料选取方法：醋酸洋红法和焙花青-铬矾法
5、步骤：
材料的选取→材料的消毒→接种和培养→结果分析与评价
知识点拨：
1、材料的选择要是选择单核期以前的花药接种，质地幼嫩，极易破碎；选择单核期以后的花药接种，花瓣已有些松动，又给材料的消毒带来困难，通常不选择盛开或略微开放的花。
2、选择月季花粉的最佳时期为完全未开放的花蕾。材料的选择是花粉植株能否培养成功的主要影响因素之一，不同植物及同一植物的不同生理状况诱导成功率都不相同。
3、选择花药时，确定花药发育时期最常用的方法是醋酸洋红法。某些植物的花粉不易着色需采用焙花青-铬矾法，这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色。
4、材料的消毒过程：
花蕾用体积分数为70％的酒精浸泡30s→无菌水冲洗→吸干表面的水分，放入质量分数为0.1％的氯化汞溶液中2～4min→无菌水再冲洗3～5次。
5、接种和培养过程中注意的情况
在无菌条件下剥离花药时要尽量不损伤花药（否则接种后容易从受伤部位产生愈伤组织），同时还要彻底除去花丝。因为花丝的存在不利于愈伤组织或胚状体的形成。
相关高中生物知识点：多聚酶链式反应扩增DNA片段
多聚酶链式反应扩增DNA片段：
1、PCR原理：在解旋酶作用下，打开DNA双链，每条DNA单链作为母链，以4中游离脱氧核苷酸为原料，合成子链，在引物作用下，DNA聚合酶从引物3'端开始延伸DNA链，即DNA的合成方向是从子链的5'端自3'端延伸的。实际上就是在体外模拟细胞内DNA的复制过程。DNA的复制需要引物，其主要原因是DNA聚合酶只能从3′端延伸DNA链。
2、PCR反应过程是：变性→复性→延伸
3、结果：上述三步反应完成后，一个DNA分子就变成了两个DNA分子，随着重复次数的增多，DNA分子就以2n的形式增加。PCR的反应过程都是在PCR扩增仪中完成的。
细胞被DNA复制与PCR技术的比较：
知识点拨：
1、DNA分子复制的人工控制
解开螺旋：在80～100℃时，DNA双螺旋打开，形成两条DNA单链，称为变性。
恢复螺旋：在50～60℃左右时，两条DNA单链重新形成双螺旋结构，称为复性。
复制条件：缓冲液，DNA模板、四种脱氧核苷酸、热稳定DNA聚合酶、两种引物。
控制仪器：PCR仪（温度周期性自动调节仪）。
2、PCR的含义是多聚酶链式反应。
3、PCR技术反应的条件：①稳定的缓冲溶液环境；②DNA模板；③合成引物；④四种脱氧核甘酸；⑤DNA聚合酶；⑥温控设备
4、PCR技术最突出的优点是快速、高效、灵活、易于操作。
5、TaqDNA聚合酶的特点是：耐高温。
知识拓展：
1、DNA含量的测定——分光光度法
2、DNA聚合酶不恩能够从头合成DNA，只能从DNA的3'端开始延伸DNA链，因此DNA复制需要引物。
相关高中生物知识点：单克隆抗体
单克隆抗体：
1、抗体：一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。从血清中分离出的抗体产量低、纯度低、特异性差。
2、单克隆抗体的制备
（1）制备产生特异性抗体的B淋巴细胞：向免疫小鼠体内注射特定的抗原，然后从小鼠脾内获得相应的B淋巴细胞
（2）获得杂交瘤细胞
①将鼠的骨髓瘤细胞与脾细胞中形成的B淋巴细胞融合；
②用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞，该杂种细胞既能够增殖又能产生抗体。
（3）克隆化培养和抗体检测
（4）将杂交瘤细胞在体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖
（5）提取单克隆抗体：从细胞培养液或小鼠的腹水中提取
3、单克隆抗体的应用
(1)作为诊断试剂，具有准确、高效、简易、快速的优点。
(2)用于治疗疾病和运载药物。
血清抗体与单克隆抗体的比较：
知识点拨：
1、融合的结果是有很多不符合要求的；如有2个B淋巴细胞融合的细胞等，所以要进行筛选。
2、筛选出能够分泌所需抗体的杂种细胞。
3、杂交瘤细胞的特点：既能大量繁殖，又能产生专一的抗体。
4、单克隆抗体的优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。
5、单克隆抗体的作用：作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质的细微差异，并跟一定抗原发生特异性结合，具有准确、高效、简易、快速的优点。用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗癌症治疗，可制成“生物导弹”，也有少量用于治疗其它疾病。
知识拓展：
制备单克隆抗体过程中的筛选：筛选是将未融合的B淋巴细胞、骨髓瘤细胞以及BB融合、瘤瘤融合的细胞通过选择培养基淘汰，筛选出B瘤融合的细胞。筛选是将产生特定抗体的B瘤细胞通过细胞培养用相应抗原检测的办法筛选出来。因为从体内取免疫过的B淋巴细胞时取出很多种，形成的杂交瘤细胞有很多种，所以需筛选出产生特定抗体的杂交瘤细胞。
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2．材料的选取
(1)常用藓类叶片（或是菠菜叶稍带些叶肉的下表皮）。
(2)原因： ①藓类叶片仅有一层叶肉细胞。 ②菠菜叶接近下表皮的叶肉细胞是海绵组织，细胞排列疏松，细胞分散，易撕取，便于观察。
3．实验流程
(1)观察叶绿体
知识点拨：
1、制作藓叶临时装片观察叶绿体时，要保持叶片有水状态，若叶绿体失水，就会缩成一团，将无法观察。2、制作观察线粒体的临时装片时，是滴一滴健那绿染液于载玻片中央用于染色，而不是滴一滴生理盐水。3、观察线粒体一般选用动物或人体细胞，而不选取植物细胞，其原因是经健那绿染色的线粒体颜色为蓝绿色，与叶绿体颜色相近，会影响对线粒体的观察。
知识拓展：
1、叶绿体和线粒体的分布：对于植物叶片，上表皮叶绿体分布较多，便于吸收光照进行光合作用。线粒体在细胞中的分布是不均匀的，代谢旺盛的部位，线粒体较多。
2、叶绿体在细胞内可随细胞质的流动而流动，同时受光照强度的影响。叶绿体在弱光下以最大面积朝向光源；强光下则以侧面或顶面朝向光源。实验观察时可适当调整光照强度和方向以便于观察。
例下列关于“用高倍显微镜观察叶绿体和线粒体”的实验说法不正确的是( )
A．健那绿染液是一种活细胞染料，几乎不损伤细胞
B．离倍显微镜下，可看到绿色、扁平的椭球形或球形的叶绿体
C．健那绿染液可将细胞质染成蓝绿色
D．藓类叶片可直接放在载玻片上观察叶绿体
答案C
相关高中生物知识点：月季的花药培养
月季的花药培养：
1、被子植物的花粉发育
（1）被子植物的雄蕊通常包含花丝、花药两部分。花药为囊状结构，内部含有许多花粉。
（2）花粉是单倍体的生殖细胞。被子植物花粉的发育要经历小包子四分体时期、单核期和双核期等阶段。
2、产生划分植株的两种途径：一种是花粉通过胚状体阶段发育为植株，另一种是花粉在诱导培养基上先形成愈伤组织，再将其诱导分化成植株。
两种途径之间没有绝对的界限，主要取决于培养基中激素的种类及其浓度配比。
3、影响花药培养的因素：
（1）材料的选择：一般来说，在单核期（通常是完全未开放的花蕾），细胞核由中央移向细胞一侧的时期，花药成功率最高。
（2）培养基的选择。
（3）此外，亲本植株的生长条件、材料的低温预处理以及接种密度等对诱导成功率又一定影响。
4、材料选取方法：醋酸洋红法和焙花青-铬矾法
5、步骤：
材料的选取→材料的消毒→接种和培养→结果分析与评价
知识点拨：
1、材料的选择要是选择单核期以前的花药接种，质地幼嫩，极易破碎；选择单核期以后的花药接种，花瓣已有些松动，又给材料的消毒带来困难，通常不选择盛开或略微开放的花。
2、选择月季花粉的最佳时期为完全未开放的花蕾。材料的选择是花粉植株能否培养成功的主要影响因素之一，不同植物及同一植物的不同生理状况诱导成功率都不相同。
3、选择花药时，确定花药发育时期最常用的方法是醋酸洋红法。某些植物的花粉不易着色需采用焙花青-铬矾法，这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色。
4、材料的消毒过程：
花蕾用体积分数为70％的酒精浸泡30s→无菌水冲洗→吸干表面的水分，放入质量分数为0.1％的氯化汞溶液中2～4min→无菌水再冲洗3～5次。
5、接种和培养过程中注意的情况
在无菌条件下剥离花药时要尽量不损伤花药（否则接种后容易从受伤部位产生愈伤组织），同时还要彻底除去花丝。因为花丝的存在不利于愈伤组织或胚状体的形成。
相关高中生物知识点：多聚酶链式反应扩增DNA片段
多聚酶链式反应扩增DNA片段：
1、PCR原理：在解旋酶作用下，打开DNA双链，每条DNA单链作为母链，以4中游离脱氧核苷酸为原料，合成子链，在引物作用下，DNA聚合酶从引物3'端开始延伸DNA链，即DNA的合成方向是从子链的5'端自3'端延伸的。实际上就是在体外模拟细胞内DNA的复制过程。DNA的复制需要引物，其主要原因是DNA聚合酶只能从3′端延伸DNA链。
2、PCR反应过程是：变性→复性→延伸
| 过程 | 说明 | 图解 |
| 变性 | 当温度上升到90℃以上时，双链DNA解聚为单链 |  |
| 复性 | 温度下降到50℃左右，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合 |  |
| 延伸 | 72℃左右时，TaqDNA聚合酶有最大活性，可使DNA新链由5'端向3'端延伸 |  |
3、结果：上述三步反应完成后，一个DNA分子就变成了两个DNA分子，随着重复次数的增多，DNA分子就以2n的形式增加。PCR的反应过程都是在PCR扩增仪中完成的。
细胞被DNA复制与PCR技术的比较：
| 细胞内DNA复制 | 体外DNA扩增（PCR） | ||
| 不同点 | 解旋 | 在解旋酶作用下边解旋边复制 | 80～100℃高温解旋，双链完全分开 |
| 酶 | DNA解旋酶、DNA聚合酶 | TaqDNA聚合酶 | |
| 引物 | RNA | DNA、RNA | |
| 温度 | 体内温和条件 | 高温 | |
| 相同点 | ①需提供DNA模板 ②四种脱氧核苷酸为原料 ③子链延伸的方向都是从5'端到3'端 | ||
知识点拨：
1、DNA分子复制的人工控制
解开螺旋：在80～100℃时，DNA双螺旋打开，形成两条DNA单链，称为变性。
恢复螺旋：在50～60℃左右时，两条DNA单链重新形成双螺旋结构，称为复性。
复制条件：缓冲液，DNA模板、四种脱氧核苷酸、热稳定DNA聚合酶、两种引物。
控制仪器：PCR仪（温度周期性自动调节仪）。
2、PCR的含义是多聚酶链式反应。
3、PCR技术反应的条件：①稳定的缓冲溶液环境；②DNA模板；③合成引物；④四种脱氧核甘酸；⑤DNA聚合酶；⑥温控设备
4、PCR技术最突出的优点是快速、高效、灵活、易于操作。
5、TaqDNA聚合酶的特点是：耐高温。
知识拓展：
1、DNA含量的测定——分光光度法
| 项目 | 说明 | |
| 原理 | DNA在260nm的紫外线波段有一强烈吸收峰，峰值大小与DNA的含量是正相关 | |
| 过程 | 稀释 | 2μLPCR反应液，加入98μL蒸馏水，即将样品进行50倍稀释 |
| 对照调零 | 以蒸馏水作为空白对照，在波长260nm处，将紫外分光光度计的赌注调节至零 | |
| 测量 | 取DNA稀释液100μL至比色杯中，测定260nm处的光吸收值 | |
| 计算 | DNA含量（μg/mL）=50×（260nm的读数）×稀释倍数 | |
相关高中生物知识点：单克隆抗体
单克隆抗体：
1、抗体：一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。从血清中分离出的抗体产量低、纯度低、特异性差。
2、单克隆抗体的制备
（1）制备产生特异性抗体的B淋巴细胞：向免疫小鼠体内注射特定的抗原，然后从小鼠脾内获得相应的B淋巴细胞
（2）获得杂交瘤细胞
①将鼠的骨髓瘤细胞与脾细胞中形成的B淋巴细胞融合；
②用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞，该杂种细胞既能够增殖又能产生抗体。
（3）克隆化培养和抗体检测
（4）将杂交瘤细胞在体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖
（5）提取单克隆抗体：从细胞培养液或小鼠的腹水中提取
3、单克隆抗体的应用
(1)作为诊断试剂，具有准确、高效、简易、快速的优点。
(2)用于治疗疾病和运载药物。
血清抗体与单克隆抗体的比较：
| 名称 | 产生 | 特点 |
| 血清抗体 | 由B淋巴 | 一般从血清中分离，产量低、纯度低、特异性差 |
| 单克隆抗体 | 由杂交瘤细胞分泌 | 特异性强，灵敏度高，能大量制备 |
知识点拨：
1、融合的结果是有很多不符合要求的；如有2个B淋巴细胞融合的细胞等，所以要进行筛选。
2、筛选出能够分泌所需抗体的杂种细胞。
3、杂交瘤细胞的特点：既能大量繁殖，又能产生专一的抗体。
4、单克隆抗体的优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。
5、单克隆抗体的作用：作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质的细微差异，并跟一定抗原发生特异性结合，具有准确、高效、简易、快速的优点。用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗癌症治疗，可制成“生物导弹”，也有少量用于治疗其它疾病。
知识拓展：
制备单克隆抗体过程中的筛选：筛选是将未融合的B淋巴细胞、骨髓瘤细胞以及BB融合、瘤瘤融合的细胞通过选择培养基淘汰，筛选出B瘤融合的细胞。筛选是将产生特定抗体的B瘤细胞通过细胞培养用相应抗原检测的办法筛选出来。因为从体内取免疫过的B淋巴细胞时取出很多种，形成的杂交瘤细胞有很多种，所以需筛选出产生特定抗体的杂交瘤细胞。
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